Необходимость эффективного учета показателей крови в ряде клинических ситуаций стала основой создания автоматизированных проточных систем ее анализа.
Для подсчета лейкоцитарной формулы в проточных счетчиках, в принципе, используются два метода. Первым из них является метод жидкостной цитохимии, (например, окраска на пероксидазу). Интенсивность окраски зависит от пероксидазной активности. Эозинофилы имеют интенсивную пероксидазную активность, нейтрофилы — выраженную активность пероксидазы, а у моноцитов она слабая. Пероксидазы нет в лимфоцитах.
Типичные приборы такого типа выпускает фирма Technicon.
Другой подход чисто биофизический: это различие клеток на основании измерения угла отражения от когерентных источников света. Наиболее современные приборы такого типа с высокой производительностью — это счетчики фирмы Abbott.
Серия гематологических автоматов и полуавтоматов фирмы Coulter (США), Sysmex (Япония), Abbott (США), Hoffman la Roche (Швейцария) позволяет использовать для общего клинического анализа венозную кровь. Рекомендовано брать венозную кровь в специальные одноразовые пробирки с порошком ЭДТА. Считается, что для исследования достаточным является 0,2 мл крови. При объеме менее 0,2 мл могут возникнуть значительные трудности в получении проб, что в свою очередь, может повлиять на конечные результаты за счет гемолиза либо образования скоплений и небольших сгустков тромбоцитов.
Вышеуказанные аппараты-автоматы с их высокой производительностью, безусловно, внесли и вносят исключительно большой вклад при диспансеризации населения, при обследовании больных без системного поражения органов кроветворения. При заболеваниях системы крови работу таких аппаратов должны контролировать врачи-лаборанты (гематологи), так как, например, автоматы считают микробласты как лимфоциты. В эритроцитах не определяются включния. Малярийные паразиты в эритроцитах вносят путаницу при подсчете эритроцитов, то же происходит при анализе эритроцитов с поражением цитоскелета.
Следует сказать, что морфология эритроцитов и лейкоцитов может быть оценена только в окрашенных мазках крови. Однако более качественные мазки крови (равномерные и имеющие стандартные размеры и толщину) получаются при использовании автоматических устройств «Неmарrер» фирмы Opton (Германия), «Seide Spinee» фирмы Corning Scientific Instruments (США).
Наиболее приняты методы окраски мазков по Нохту, Паппенгейму, Романовскому-Гимзе. Автоматическая окраска мазков может быть осуществлена с помощью специальных устройств, например, «Hematek» фирмы Ames (США), в котором ручным способом загружаются нефиксированные мазки. Последующее автоматическое дозирование красителей и буферных растворов обеспечивает стандартную и равномерную окраску мазков (Sysmex).
Известно, что при приготовлении мазка крови общепринятым методом клетки распределяются случайно. Хотя имеется тенденция распределения мононукле-аров по периферии мазка.
В настоящее время, помимо общепринятого метода приготовления мазка, ведутся работы по созданию упорядоченного монослоя на стандартном предметном стекле. Так, например, для создания монослоя кровь наносят на стекло пером. При этом распределение лейкоцитов соответствует кривой Гаусса. Эти полоски можно наносить как из венозной крови, так и из капиллярной. В качестве антикоагулянта используется ЕДТА или цитрат (3,9%). Линейные дорожки крови окрашиваются по Романовскому-Гимзе. Их исследование предусматривает изучение как нормальных, так и аномальных лейкоцитов с учетом их распределения по всей длине дорожки крови. Вполне достаточно, используя иммерсионный объектив, идти по длине полосы, классифицируя и сопоставляя каждый лейкоцит, который появляется в поле зрения.
Таким образом, в результате дифференциального счета получается правильное процентное распределение, полностью исключаются или сводятся к минимуму случайные ошибки.
При световой микроскопии мазков могут быть обнаружены нарушения как эритроцитов, так и лейкоцитов, возникающие в условиях патологии. Нарушения эритроцитов выражаются в уменьшении или увеличении размера, изменении их формы, интенсивности и характера окрашивания, в появлении патологических включений. Нарушения в лейкоцитах выражаются в .гиперсегментации нейтрофилов, вакуолизации клеток, появлении атипичных мононуклеаров, изменении размеров клеток и т.д.
Исследование морфологических особенностей эритроцитов и лейкоцитов крови в лейкоконцентрате на мазке может дать ценную информацию для установления диагноза, для прогностической оценки, контроля эффективности проводимых лечебных мероприятий.
При действии физических и химических факторов, с которыми сталкивается человек в современных экологических условиях, а также в своей трудовой деятельности, большинство изменений функции системы кровообращения имеет адаптационный характер. Лишь в крайних случаях эти изменения являются следствием повреждения. Выявить и правильно оценить адаптационные гематологические реакции на действие токсических факторов малой интенсивности трудно. Не всегда имеется четкая картина различных нарушений. Небольшие изменения количества клеток крови легко «теряются» среди физиологических колебаний, свойственных этим показателям, а сами изменения ограничены в своей направленности.
Одним из перспективных направлений изучения крови может быть цитохимический анализ ферментных систем в клетках крови. Исследования на клеточном уровне могут выявить адаптационные и компенсаторные изменения обменных процессов в тех случаях, когда клетки морфологически не меняются.
Так, например, изучение влияния облучения на кроветворную систему у большинства жителей и ликвидаторов последствий на ЧАЭС цитохимическими методами показало нарушение созревания нейтрофильных лейкоцитов, о чем свидетельствует низкая активность миелопероксидазы в них.
Проведение цитохимических исследований также важно в процессе изучения злокачественной трансформации клеток при лейкозе, что имеет огромное значение для дифференциальной диагностики гематологических заболеваний. Стабильность цитохимических особенностей каждого вида клеток крови позволяет определять даже морфологически нераспознаваемые бластны клетки костного мозга.
Компьютерные методы изучения клеток широко используются на мазках крови для оценки клеточной пролиферации, определения клеток, находящихся в различных фазах клеточного цикла. Такие исследования важны для понимания патогенеза многих заболеваний и для изучения механизма действия различных терапевтических агентов или факторов окружающей среды.
Сочетание классических «старых» методов с анализом изображения, компьютеризацией и другими современными техническими средствами открывают новые пути для объективизации, повышения производительности тpуда и воспроизводительности результатов, создания новых методик и решения вопросов ранней диагностики прогнозирования, оценки эффективности терапии.
Форменные элементы крови: эритроциты, тромбоциты, гранулоциты (полинуклеары), лимфоциты, плазматические клетки и моноциты (мононуклеары), а так же так называемые ДНК-синтезирующие клетки, которые обнаруживаются в крови в единичном числе.
Для кроветворения детей характерна лабильность кроветворного аппарата, относительная легкость появления миелоидной и лимфоидной метаплазии под влиянием самых незначительных факторов и причин. Вместе с тем гемопоэз у детей имеет выраженную склонность к процессам регенерации.
Количество лейкоцитов у грудных детей колеблется в среднем от 11 ООО до 16 ООО, можно считать, что в этом возрасте лейкоцитов больше, чем в последующие годы
Таблица 5 — Лейкоцитарная формула крови детей в % в возрасте от 1 до 15 лет (по А.Ф.Туру)
|
Возраст, годы |
Нейтрофилы |
Эозинофилы |
Моноциты |
Лимфоциты |
|
1—2 |
34,5 |
2,5 |
11,5 |
50,0 |
|
2—3 |
36,5 |
1,5 |
10,0 |
51,5 |
|
3—4 |
38,0 |
1,0 |
10,5 |
49,0 |
|
4—5 |
45,0 |
1,0 |
9,0 |
44,5 |
|
5—6 |
43,5 |
0,5 |
10,0 |
46,0 |
|
6—7 |
46,5 |
1,5 |
9,5 |
42,0 |
|
7—8 |
44,5 |
1,0 |
9,0 |
45,0 |
|
8—9 |
49,5 |
2,0 |
8,5 |
39,5 |
|
9—10 |
51,5 |
2,0 |
8,0 |
38,5 |
|
10—11 |
50,0 |
2,5 |
9,5 |
36,6 |
|
11—12 |
52,0 |
2,0 |
8,0 |
36,0 |
|
12—13 |
53,5 |
2,5 |
8,5 |
35,0 |
|
13—14 |
56,5 |
2,5 |
8,5 |
32,0 |
|
14—15 |
60,5 |
2,0 |
9,0 |
28,0 |
Количество базофилов не превышает одного процента и составляет в среднем 0,5%. Плазматические клетки — от 0% до 0,1%.
|
озраст, годы |
Нейтрофилы |
Эозинофилы |
Моноциты |
Лимфоциты |
|
1—2 |
34,5 |
2,5 |
11,5 |
50,0 |
|
2—3 |
36,5 |
1,5 |
10,0 |
51,5 |
|
3—4 |
38,0 |
1,0 |
10,5 |
49,0 |
|
4—5 |
45,0 |
1,0 |
9,0 |
44,5 |
|
5—6 |
43,5 |
0,5 |
10,0 |
46,0 |
|
6—7 |
46,5 |
1,5 |
9,5 |
42,0 |
|
7—8 |
44,5 |
1,0 |
9,0 |
45,0 |
|
8—9 |
49,5 |
2,0 |
8,5 |
39,5 |
|
9—10 |
51,5 |
2,0 |
8,0 |
38,5 |
|
10—11 |
50,0 |
2,5 |
9,5 |
36,6 |
|
11—12 |
52,0 |
2,0 |
8,0 |
36,0 |
|
12—13 |
53,5 |
2,5 |
8,5 |
35,0 |
|
13—14 |
56,5 |
2,5 |
8,5 |
32,0 |
|
14—15 |
60,5 |
2,0 |
9,0 |
28,0 |
